Стерилизация чашек петри в сухожаровом шкафу

Обновлено: 18.05.2024

Для работы в бактериологической лаборатории используют Лабораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бактериологические петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу (стеклограф), стерилизаторы, дистилляторы и т. п.

Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллированной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с притертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.

Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, завертывают по 10— 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязывают от попадания пыли.

В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полоской бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.

В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специальные пеналы.

Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.

Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясо-пептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат.

Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.

Стерилизация — Это полное уничтожение всех микроорганизмов (патогенных и сапрофитных) на стерилизуемом объекте.

Стерилизацию проводят различными методами: кипячением, паром под давлением (в автоклавах), текучим паром (в аппаратах Коха), сухим жаром (в печах Пастера), фильтрованием материала через бактериальные фильтры, прокаливанием на пламени горелки и др.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторах. Кипячением обычно стерилизуют инструменты в течение 30-40 мин. Однако при этом методе не всегда достигают полного уничтожения микробов. Споры некоторых микроорганизмов выдерживают кипячение более 3 ч.

Прокаливание на пламени применяют для стерилизации бактериологических петель, игл, скальпелей, ножниц, пинцетов и др.

Пастеризация - Это термическая обработка продуктов при температуре ниже 100 °С с последующим быстрым охлаждением до 6-9 °С.

При пастеризации погибают неспоровые микроорганизмы, уменьшается общее количество микробов. Пастеризацию проводят при различных режимах: длительная при 63-65 "С в течение 20-30 мин; кратковременная при 75 °С от нескольких секунд до 5 мин; моментальная при 90-93 °С без выдержки. Охлаждение стерилизуемого продукта необходимо для того, чтобы предотвратить прорастание в вегетативные клетки спор, сохранивших жизнеспособность после однократного прогревания.

Стерилизацию и пастеризацию проводят в различных стерилизующих аппаратах.

Стерилизация лабораторного оборудования

Стерилизация (от латинского слова sterilis — бесплодный) — обеспложивание, освобождение от всего живого. В микробиологической практике стерилизации подвергают инструменты, посуду, питательные среды и другие материалы, применяемые в работе.

Стерильность может быть достигнута при помощи физических и химических методов.

Стерилизация

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1—10 штук. Пастеровские пипетки по 3—15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2—2,5 см и длиной 50—70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерилизуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобранном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микро¬флорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) — 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, пред¬варительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные петли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, стерилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не произошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Прокаливание в целом занимает 5—7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочками, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нужной величины. После этого каждый вид материала в отдельности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Изделия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в течение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофлорой—в автоклаве при давлении 1,5—2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и снаружи пересыпают тальком для предохранения их от склеивания. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде помещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для дальнейшей работы, складывают в металлический бак, пломбируют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давле¬нии 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с отработанным материалом переносят на металлических подносах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы—в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром.

Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обогрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда тем¬пература в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование тре¬щин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением.

Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутрен¬ний — стерилизационной камерой. В водопаровом котле происходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые прохо¬дит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава герметически привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомерное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для определения давления, создающегося в стерилизационной камере. Нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показаниями манометра и температурой имеется определенная зависимость (табл. 1).

Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Показания манометра, атм.

t кипения воды,°C

Красная черта на шкале манометра определяет максимальное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Предохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерного повышения давления. Его устанавливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нужно производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты — нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой камере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилизации, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, нарушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом.

Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: нижнюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю—на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на трубе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медленно ослабляют прижимные приспособления и открывают крышку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации определяются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуществляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром.

Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколь¬ко небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых изменяются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повторно, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод получил название дробной стерилизации: обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стерилизациями материал выдерживают при комнатной температуре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация.

Тиндализация—дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60—65°С в течение 5 дней или при 70— 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров. Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзотоксинов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как стерилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), способные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3—5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), задерживающие взвешенные частицы, но пропускающие бактерии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживающие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в автоклаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры различаются по величине пор и обозна¬чаются порядковыми номерами (табл. 2).

Методы стерилизации лабораторной посуды, инструментов, материалов, воздуха

Стерилизация — это уничтожение в материалах, продуктах, жидкостях, на поверхностях посуды и оборудования всех видов микроорганизмов и их спор. Мы уже рассказывали о таком способе стерилизации, как автоклавирование, упоминали другие способы стерилизации. Сегодня расскажем о самых популярных из них подробнее.

Стерилизация сухим теплом

Часто применяется в лабораторной практике. Для этого используются суховоздушные термостаты или сушильные шкафы. Высокие температуры гораздо эффективнее убивают живые клетки микроорганизмов, чем низкие температуры. Многие бактерии способны пережить обработку даже жидким кислородом при температуре -252 °С.

Обработка сухим теплом менее эффективна, чем влажным. Для полного уничтожения микроорганизмов в условиях влажного тепла нужно выдержать материал около 30 минут при +110-130 °С, а в суховоздушном шкафу — 45 минут при +180 °С.

Сухим теплом стерилизуют лабораторную стеклянную посуду (колбы, пипетки, пробирки, чашки Петри и пр.) при +160-200 °С. Чем ниже температура, тем дольше длится стерилизация: от 2 часов при +160 °С до 15 минут при +200 °С.

Стерилизация влажным теплом

Процедуру проводят в аппаратах Коха, похожих на бытовую пароварку. Вода кипит в нижнем отделении и пар стерилизует материалы, помещенные в верхнее отделение. Такой стерилизации обычно подвергают микробиологические среды, которые нельзя нагревать выше +100 °С.

Кипячением стерилизуют медицинские металлические инструменты, шприцы, резиновые перчатки, пинцеты, резиновые груши и т.п. Время процедуры отсчитывают от того момента, когда закипела вода.

Металлические инструменты кипятят в слабом (двухпроцентном) растворе гидрокарбоната натрия, который не оказывает на металл коррозионного действия.

Уничтожать микроорганизмы можно рентгеновским, альфа-, бета- и гамма, нейтронным, УФ-излучением. Обычно этот метод применяется на производствах. В лабораториях и медицинских учреждениях часто применяют бактерицидные лампы и установки типа «Амбилайф» для очистки воздуха и поверхностей в помещении.

Пастеризация

Применяется для обработки продуктов питания и некоторых лабораторных образцов. Она подразумевает уничтожение многих живых микроорганизмов, грибковых спор при температуре не более 80 °С, в течение 10 минут или менее. При этом вкусовые качества продуктов не изменяются. Кроме этого, сохраняются некоторые виды полезных бактерий.

Прокаливание в пламени

Этим методом стерилизуют микробиологические петли и иглы, концы пинцетов, сверла для пробок и т. п., иногда стеклянные принадлежности. Прокаливание производится в пламени газовой горелки. Более технологичный способ — прокаливание при температуре до +850 °С в электрическом стерилизаторе. В этом случае удается избежать загрязнения инструментов продуктами горения пламени.

Фильтрование

Для стерилизации питательных сред или жидкостей, разрушающихся при нагревании, используется фильтрование под вакуумом через специализированные фильтры. Фильтры подбирают таким образом, чтобы диаметр отверстий был меньше размера бактерий. Применяются фильтры фарфоровые, стеклянные, из глинозема, асбестовые, мембранные и др. Для того, чтобы оптимизировать процесс фильтрации, выпускаются специальные приборы со встроенным вакуумным насосом, например, система вакуумной фильтрации Lafil 400-LF 30.

Химическая стерилизация

Для химической дезинфекции применяются самые разнообразные вещества:

этиловый и изопропиловый спирты;
соединения хлора (гипохлорит натрия, хлорамины) и йода;
соединения тяжелых металлов, например, ртути, серебра;
производные фенола;
микробоцидные (убивающие микробы) газы, к которым относят пары формальдегида, пропиолактона, оксид этилена.

Химическая стерилизация используется в лабораториях для оперативной обработки, а также в тех случаях, когда невозможно использовать другие методы.

Автоклавирование в лабораториях и медицинских учреждениях

Под автоклавированием понимают обработку инструментов, белья, химической посуды и приспособлений, других материалов горячим паром при повышенном давлении. В этих условиях достаточно быстро, менее, чем за час, погибают все бактерии и вирусы.

Автоклавирование — более узкий термин, чем стерилизация. Стерилизация тоже подразумевает уничтожение всех патогенных микроорганизмов, но способы могут быть выбраны разные, в том числе и автоклавирование. Кроме этого, бывает:
• химическая стерилизация (различными химическими реактивами, например, этиловым спиртом, газами, перекисью водорода, соединениями йода, хлорамином и т.п.);
• стерилизация ультрафиолетом, например с помощью бактерицидных облучателей, установок для обеззараживания воздуха Амбилайф;
• стерилизация ультразвуком;
• обработка инфракрасным излучением;
• стерилизация в сухожаровых шкафах (воздушных стерилизаторах).

Автоклавы

Автоклавирование производится с помощью специальных аппаратов — автоклавов. Автоклавы различаются размерами, конструкцией, назначением. В лабораториях и медицинских учреждениях они применяются для стерилизации. На промышленных предприятиях с помощью автоклавов производят красители, гербициды, резинотехнические изделия, стройматериалы, карбоновые волокна, металлы, продукты питания и многое другое. Выпускаются и бытовые автоклавы для консервирования в домашних условиях.

Принцип работы автоклава основан на том, что при нормальном давлении вода кипит при +100 °С. При дальнейшем подводе тепла, температура воды не повышается, а начинается интенсивное парообразование. Если сосуд закрыт герметично, то давление пара начинает расти. Начинает расти и температура воды и пара. В сбалансированной системе процесс испарения прекращается, а образовавшийся горячий пар легко проникает в клетки микроорганизмов, убивая их.

Горячий пар, в том числе, убивает и споры. Для увеличения обеззараживающего эффекта, многие модели автоклавов оснащены системой для удаления воздуха и кислорода, в нем содержащегося. Дело в том, что кислород может способствовать защите некоторых бактерий. Напротив, пар в автоклаве с откачанным воздухом обладает большей проникающей силой.

Автоклавы бывают разных конструкций, размера, степени автоматизации, но все они состоят из:
• внешнего корпуса, способного выдерживать высокое давление;
• крышки со встроенным манометром и клапаном для снижения избыточного давления;
• камеры с водой, генерирующей пар (оснащена краном для слива остатков воды после окончания работы);
• камеры для стерилизуемых материалов и оборудования, в которую подается пар под давлением.

Подвод тепла может быть как внешним, например, от газовой или электрической плиты, так и встроенным (электронагреватели).

Работа с автоклавом сопряжена с определенным риском. Оставленный без присмотра автоклав способен взорваться. Именно поэтому автоклавированием разрешается заниматься только специально обученному персоналу.

Автоклавирование

Процесс автоклавирования начинается с того, что крышку прибора с помещенными в него стерилизуемыми предметами герметично закрывают и закрывают все краны, кроме клапана для выхода воздуха. В камеру для воды наливают воду и включают нагреватели. Дожидаются того момента, когда камера со стерилизуемым материалом заполнится паром, который начнет вытеснять воздух. Давление поднимают до 1 атмосферы и ждут полного выхода воздуха. После этого доводят давление (по показаниям манометра) до нужной величины и с этого момента начинается отсчет времени стерилизации.

После того, как стерилизация окончена, сначала отключают нагреватели, потом открывают кран и выпускают пар. Только после того, как манометр покажет значение «0», крышку можно открыть. Все материалы из автоклава сразу же выгружают — оставлять их там нельзя! Воду из камеры сливают и оставляют автоклав для просушки.

Различают два основных режима автоклавирования:

1. Более жесткий с температурой +132 °С и давлением в 2 атмосферы. Время стерилизации 20 минут. В этом режиме стерилизуют перевязочный материал, стеклянную, фарфоровую и из нержавейки посуду, устойчивые к коррозии инструменты, стеклянные шприцы, иглы, пинцеты и пр.; белье, спецодежду.
2. Щадящий с температурой +120 °С и давлением 1,1 атмосферы. Время — 45 мин. Так стерилизуют изделия из пластиков (полипропилен, полиэтилен высокой плотности, полистирол), резины, латекса.
В медицинских учреждениях и биологических лабораториях периодически проводят проверку работы автоклава. Для этого при очередном цикле работы устройства внутрь закладывают ампулы с бензойной кислотой (становится фиолетового цвета при нагревании до +120 °С) или с мочевиной (расплавляется при +132 °С). Для более точного анализа в автоклав закладывают пробирки с сапрофитами и их спорами, а потом в лаборатории проверяют, пережили ли они процедуру.

Стерилизация воды и питательных сред

Вся посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и высушена. Культуральные сосуды (колбы, пробирки, банки, чашки Петри и т.п.) перед заполнением их питательными средами стерилизуют завернутыми в плотную бумагу сухим жаром в сухожаровом шкафу, размещая на металлических полках. Продолжительность стерилизации при 150°С – 2,5ч., при 160°С – 2 часа. За это время погибают не только бактерии, но и их споры. Следует иметь ввиду, что для этого минимального времени, необходимого для стерилизации, требуется вносить поправку на время, необходимое для нагрева камеры до нужной температуры. Еще более строгой стерилизации можно добиться под давлением в автоклаве, поскольку влажный жар более губителен для микроорганизмов и спор патогенов. В этом случае посуду заворачивают в фольгу или крафт-бумагу, сверху – в целлофан; верхнюю часть пипеток закрывают ватой, каждую заворачивают в бумагу. Автоклавируют под давлением 2 атм. (133°С) в течение 25-30 мин.

Стерилизация инструментов

Предварительная стерилизация инструментов (скальпелей, пинцетов, игл и др.) производится прокаливанием сухим жаром в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 160°С. Шприцы, ножницы, пробочные сверла удобнее кипятить. При этом режущие части инструментов заворачивают в марлю или вату, чтобы уберечь от ударов. Металлические инструменты нельзя автоклавировать: под действием пара они ржавеют и тупятся. Непосредственно перед работой и в процессе работы инструменты еще раз стерилизуют в ламинар-боксе, помещая их в фарфоровый стакан с 96%-ным этиловым спиртом, затем обжигая в пламени спиртовки. После этого каждый инструмент помещают между листами предварительно простерилизованной плотной бумаги, сложенной в пачку. Стерильный инструмент используют только для одноразовой манипуляции. Перед повторным употреблением его снова следует простерилизовать спиртом и обжечь. Очень тонкие инструменты (иглы, тонкие лезвия) могут тупиться при обжигании, поэтому их стерилизуют, погружая в спирт.

Стерилизация материалов

Вату, марлю, ватные пробки, бумажные матрасики, фильтровальную бумагу, халаты стерилизуют в автоклаве под давлением 2 атм. в течение 25-30 мин. Бумажные матрасики из плотной офисной бумаги можно стерилизовать в сухожаровом шкафу, однако со временем бумага темнеет и становится хрупкой.

Стерилизация ламинар-бокса и операционной комнаты.

Стерилизация операционной комнаты и ламинар-бокса является необходимой процедурой, в результате которой должны быть устранены источники возможной инфекции тканевых и клеточных культур (бактерии, споры, грибы).

Помещение, где осуществляются стерильные операции должно содержаться в абсолютном порядке, поэтому в первую очередь его очищают от грязи и пыли. Грязь удаляют тщательным отмыванием водой с мылом рабочей поверхности столов, стен, пола, углов. Затем пол протирают дезинфицирующим раствором («Доместос» или др.чистящее средство), столы протирают спиртом. Вторым этапом стерилизации является облучение ультрафиолетовым светом, который губительно действует на вегетирующие формы микроорганизмов.

Ламинар-боксы предназначены для выполнения работ, требующих стерильности, которая обеспечивается с помощью бактериальных воздушных фильтров. Внутренние поверхности ламинар-бокса перед работой протирают спиртом, за 10-20 минут до начала работы включают ультрафиолетовую бактерицидную лампу.

Перед работой в ламинар-боксе следует плотно закрыть дверь в асептическую комнату, одеть чистый халат, шапочку, маску, бахилы. Протереть руки спиртом. В процессе работы недопустимо открывать двери в операционную комнату. Нужно воздержаться от лишних разговоров и ненужных движений, периодически протирать руки спиртом, не выносить стерильные инструменты и материалы из ламинар-бокса. Использовать инструмент только для одноразовой операции и не употреблять его, если возникло подозрение, что он соприкасался с нестерильной поверхностью. Необходимо избегать движений руками над открытыми чашками Петри и сосудами со стерильной средой. Недопустимо прерывать выполнение операции, вынимая руки из ламинар-бокса.

Стерилизация воды и питательных сред

Существуют два основных способа стерилизации питательных сред – автоклавирование и фильтрование. В первом случае разлитые в колбы или пробирки питательные среды и дистиллированную воду закрывают ватными пробками и фольгой и автоклавируют при температуре 120°С и давлении 1 атм. в течение 20 минут. Можно сначала методом автоклавирования простерилизовать большое количество среды в одном объеме, а затем в ламинарном боксе разлить ее в стерильную посуду для культивирования.

Время термической обработки зависит от объема посуды, в которую разлита среда. Например пробирки со средой стерилизуют 15 минут при температуре 115°С, а колбы содержащие 500 мл среды дезинфицируют 30 минут при температуре 121°С и 45 минут при 115°С.

Во втором случае используют стерильные фильтры Зейтца, Беркефельда, мембранные фильтры, незаменимые для приготовления сред с термолабильными компонентами (некоторые стимуляторы роста, витамины, антибиотики, аминокислоты, растительные экстракты), которые разрушаются при автоклавировании. Фильтрация сред (холодная стерилизация) применяется также для приготовления смесей ферментов и выделения изолированных протопластов, сред с биологически активными компонентами.

Как построить свою речь (словесное оформление): При подготовке публичного выступления перед оратором возникает вопрос, как лучше словесно оформить свою.

Читайте также: